分析化学论坛 » 【生化分析】 » 收到细胞的处理方式

深水 发表于 2007-11-23 14:23

收到细胞的处理方式

[size=2]1. 收到细胞株包裹时， 请检查[/size][url=http://show.bioon.com/reagent/list.asp?sortid=25&typeid=297][size=2][color=#0000ff]细胞株[/color][/size][/url][size=2]冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞 7e%A'D,~b4w
株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。
Pb]N3T 2. 冷冻细胞解冻程序: f&ZaA~8QcLH
2.1. 依据[/size][url=http://show.bioon.com/reagent/list.asp?sortid=25&typeid=297][size=2][color=#0000ff]细胞株[/color][/size][/url][size=2]数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比
JQ+p_)V1?s"x| 例， 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之 ip O)OV1Es
血清种类， 若因实验需要， 必须有所不同时， 务必以缓慢比例渐次改变培养 b IqUblA$u8F
基组成， 确定细胞适应后， 方进行所需之实验。 i6?[j6P[/S
Q6A ~
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse |9Jud4k3hV(VmvkR
serum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据[/size][url=http://show.bioon.com/reagent/list.asp?sortid=25&typeid=297][size=2][color=#0000ff]细胞株[/color][/size][/url][size=2]资料单指定之血清种
g(pZt Of|c(K 类培养之。
CUg M+h 2.3. 将培养基置于37 °C 水槽中回温， 回温后喷以70 % 酒精并擦拭之， 移入无 wSc/R q K;kh)L
菌操作台内。取出冷冻管， 立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 水面高度不可
Ui%R:V8nj"uZK"C 接近或高过冷冻管之盖沿， 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全
^M R+K
f `K 部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部， 移入无菌操作台内。 Hn*dr#fK4Hg
2.4. 依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask
p$~B+P!i@0cf4XMU 中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混 ,P,By"T5|0k#^
合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。
:|){ w7kj 2.5. 对绝大多数细胞而言，1 % 以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活 {8nV |*^t5H
化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除， 待第二天确定细胞生长或贴附良 h2Tj\}f"bz
好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需 W
[3v1a
A.EN L!FN
立即去除DMSO 者， 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中， .C/a ZC{!dK
离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基， 6ShCC$d,d;o a
将细胞均匀混合后， 转移至培养瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。
#e$~/^Y6N%? 收到T25 flask 细胞时， 处理方式为︰ BvYZJ x
1. 于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask 均加满培养基。请检查 `r4K G2A5k
flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题， 不 ([t5S#hhfI
要打开盖子，请立即通知细胞实验室。
u"K;o[!Q 2. 将原封之T25 flask 静置于37 °C， 5 % CO2 培养箱中，使细胞回温至37 °C， 并 @.F ?1[[2P7I;_`
让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后，于无菌操作箱内取出flask o3U+|Y B.~.?-Me2E
内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，仅留约5-10ml 培养基于flask 内，依
a6y*N| ~"H,NsLC 一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘， 则将细胞做传代培养。[/size]

查看完整版本: 收到细胞的处理方式