准备聚丙烯酰胺凝胶电泳
凝胶的制备及电泳:（1）玻璃板处理。用去污剂和清水将玻璃板洗涤干净，并用去离子水冲洗，最后用95%乙醇擦拭、干燥；取0.4mm的边条，置于左右两侧，将短板压于其上，用夹子固定，插好梳子，准备灌胶。
（2）制备凝胶。 配置100mL 6%的变性聚丙烯酰胺凝胶:加入40%丙烯酰胺15 mL、尿素42 g、5× TBE 20.0 mL、10%过硫酸铵0.45 mL，0.1 mLTEMED ，用蒸馏水定容到100 mL，充分混匀。hs+@kQ y
（3）灌胶。用注射器吸取上述溶液，排除针管内的空气，将注射器嘴插入两块玻璃板的空隙处，把溶液注如入其中，避免产生气泡。把玻璃板斜靠在试管架上，可减少泄露和凝胶的变形。立即插入梳子，避免梳齿下产生气泡。让丙烯酰胺于室温下聚合1 h。聚合好的凝胶可在使用前贮放1~2 d，需用1× TBE浸湿的纸巾包住梳子及凝胶顶端，再用保鲜膜包好，贮于4℃。
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（4）预电泳。胶聚合以后，将玻璃板安装在电泳仪上，电泳槽中加入足量的1× TBE 缓冲液。小心移去梳子，用蒸馏水清洗加样孔，80 W恒功率预电泳30 min，以去除气泡。
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（5）点样。把DNA样品与适量6x凝胶加样缓冲液混合，95℃变性 5 min，立即置于冰上冷却待用，每个加样孔加3~5μL样品DNA。6iR @9G&` @#m2Em
（6）电泳。70 W恒功率电泳，溴酚蓝至胶的四分之三处时，终止电泳。
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银染检测：
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（1） 固定（脱色）。在托盘1中加入1.5L固定/终止液，将有胶的玻璃板放入托盘中，轻摇直到胶全部脱色；也可将胶在溶液中浸泡过夜（不摇动）。将溶液回收待用。$Q*f0fd}w+`
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（2）洗胶。在托盘2中用1.5 L蒸馏水洗凝胶3次，每次3 min。在将玻板取出时，让玻板竖直滴干水10-20S。#Fg*r/F6I&x7z)`
（3）染色。在托盘3内加入1.5 L染色液，将胶板放入托盘中轻摇30 min。)I*_z2gr2YubZ*_
（4）洗胶。将胶浸入托盘2中，快速摇晃数秒，拿出，滴干水，立即将胶置于配制好的显色液中。注意，从将胶置于水中到将其放入显色液中，时间不超过5~10 s。6m5D3S O J7f{
（5）显影。轻摇显色液，直至胶上所有的条带都出现。
（6）定影（终止显色）。将回收的固定/终止液倒入显色液中，反应2~3 min。
（7）洗胶。将胶板用蒸馏水洗2次，每次2 min。Gv E!u$Yn
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（8）干胶。室温下自然干燥。
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条带观察和记录:把胶板拍照，也可干燥后永久保存。
今古结合
一点不懂。看起来好像古老的手工初期造电影胶片的技艺。能感觉到历史的层次。 a }K.gC L+c2S6`8R?I Ol t
Alven
07/01/08 太麻烦了哦
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