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judge0zz8 发表于 2008-1-10 15:00

内标的选择方法

[b]内标的选择方法[/b]Y6|b4Z@-~U_
         为什么要用内标法4VK`,m$n }
内标法
Ejl-yB   指选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号之比为定量依据，测定待测组分含量的方法。
\6m T3E)?v2T 1.   体内药物分析的特点
R,Te \SQ~/Oy      （1）药物浓度低w4B(B~ q$tP
     （2）内源性杂质干扰
a2]5u$|H*zU           样品预处理是必经步骤
Fv0K$x(Uf#AJ;A 在预处理过程中,提取时通常不采用反复提取的方法，多半只进行一次（至多两次）提取，一般并不考虑“提取尽药物”。u,k5r0v Y&WJ4p1Vz
要达到样品定量测定的目的，提取溶剂必须精确加入，提取液要定量转移，在以后的各个阶段，如蒸发、溶解以及衍生化、进样操作中也要尽可能一致，才能确保各份样品提取率一致 'AMQu9x'{f6j,V'j
在实际操作中，往往难于达到每次操作的完全平行，因而会引入较大的误差。这种情况下，采用内标法定量就很有必要#`g6J_/~W D'y
            内标的基本要求EK4rl4[5Q-RH
1.  供选作内标的化合物或药物,其理化性质必须和被测组分十分相近
1AI.K l)B#zI      例如，内标在水相和有机相中的分配情况、挥发性、对萃取容器的吸附性以及层析行为等应与被测组分相似 。分配行为与挥发性近似，才能保证与被测组分有平行的回收率；层析行为相近，其保留时间、峰形才能与被测组分近似，二者峰面积（或峰高）比值才恒定
.B$vAg0N%a@"e} 2.  内标的色谱峰应靠近被测组分的色谱峰，最好位于几个被测组分色谱峰的中间，但又能完全分离
m4^7ZT O m Z 3.  内标浓度的选择 F'lkq&C5^w
   一般内标加入量应控制在使标准曲线中段的药物与内标物响应值（注意不是浓度）比近似为1 BL%e&M
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4.  对内标的纯度要求
;XGR0`DS     从实际应用角度出发，不苛求内标具有高纯度与高含量，只要求在同一次测定中，标准曲线和样品各管内内标加入量相等
zK;T;_rjhdZ 5.   内标物能很好地溶解在样品中，但不能与样品发生化学反应
%b}CD*y.R/s 6.   供作内标的化合物不应当是体内的内源性成分，或药物在体内可能产生的代谢物，并且最好不用患者可能同时使用的其他药物
:O8~7i9a ~g#_        HPLC为分析方法时内标的选择
q0FQH3Ey~         GC为分析方法时内标的选择
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w 应用GC进行体内药物分析时，内标的选择基本与HPLC中相同，但由于GC法本身的一些特点，相应带来一些必须考虑的因素
7m&k6[5Q!j[bR 内标物必须有一定的挥发性，在所选择的GC条件下能够气化 O'g6Jx0^ ^Q,t&[
GC测定一般需要在120度以上柱温条件下进行，因此内标必须是遇热稳定的
%P,nB%lGg:WA-k GC中，衍生化经常是必需的，内标物必须和待测组分发生相同的衍生化反应
`7oc+e:cY f GC测定时若采用氮－磷检测器（Nitrogen Phosphorus Detector，NPD）或电子捕获检测器（Electron Capture Detector，ECD）时内标仅仅与待测物结构相似还不够，必须相应地含有N（P）或卤素原子，才能被检测器所检测到
]*|w$_ f-^;@                 例如，用GC测定血清中的氯丙嗪时，采用的是ECD检测器，此时若采用丙嗪作内标，虽然结构很相似，但由于丙嗪分子结构中无电子亲和性很强的氯元素，因此对ECD不敏感，不能产生色谱峰 8{8E(H%yLd"I%~

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alven 发表于 2008-1-22 13:03

棒

又复习一遍。 ri#v8`"dQ
C6@ b$~Q"r[7Tc
Alven

kwanxy 发表于 2008-1-23 11:35

学习一下:D

jinfeng47 发表于 2008-3-19 16:41

回复 1# 的帖子

xie xie!

yuping200352 发表于 2008-10-30 18:35

thanks a lot for sharing

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