糖的分离技术
[align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]糖类化合物包括：单糖、寡糖、多糖[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]是自然界存在的蛋白质和核酸之外的又一类生物大分子，但是研究却落后于前两者，原因在于：糖的种类繁多，结构复杂且多为异构体大部分糖没有紫外或荧光响应，使其分析检测困难，一般单糖及寡糖仅在主要基团——CHOH的构型排列上有所区别，要进行分离纯化及纯度鉴定比较困难。多糖及复合多糖首先需要降解为相应结构简单的多糖或单糖，再来确定其结构。[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt] [/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]由糖的性质，一般采用的分离技术主要有：常用的沉淀法、电泳、色谱法等等，[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]多糖分离[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]主要有[u]沉淀法、色谱法、电泳分析以及膜分离[/u]等。[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][b][font=宋体][size=12pt]1'X.N%N*F}[/size][/font][/b][b][font=宋体][size=12pt]色谱分离[/size][/font][/b][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]依据被分离多糖组分间的理化性质差异及其在固相载体和流动相之间分布和流动速度的差异而达到分离的目的。[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][b][font=宋体][size=12pt]它[/size][/font][/b][font=宋体][size=12pt]的优势在于能够降糖类化合物中的糖逐一分离，从而准确的进行定量定性分析，在糖的分析中具有重要作用。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]多种色谱方法可用于糖类分析，但都存在一定局限性。常用的有高效液相色谱、[u][color=black]凝胶色谱[/color][/u]、[u]离子交换色谱[/u]等[/size][/font][font=宋体][size=12pt][/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][size=12pt][font=Times New Roman]1.1
[/font][/size][b][font=宋体][size=12pt]凝胶渗透色谱法[/size][/font][/b][font=宋体][size=12pt]（[/size][/font][size=12pt][font=Times New Roman]GPC[/font][/size][font=宋体][size=12pt]） 常用于多糖分析，[/size][/font][font=宋体][size=12pt]常用的凝胶有葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶,以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂，[/size][/font][font=宋体][size=12pt]相对分子质量不同的多糖按照其大小顺序先后流出色谱柱，通过一系列不同相对分子质量标准多糖的校正曲线得出相应的相对分子质量。[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]目前糖专用分析柱一般通过空间排阻、离子交换、配位交换、分配吸附、等不同模式组合，可以有效的分离单糖、寡糖、多糖和糖醇。使用简便快捷，但制备比较贵。[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]优点：[/size][/font][font=宋体][size=12pt]方法简单、快速 缺点：分辨率低、载样量少，不适宜粘性多糖的分离[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]1.2
[/size][/font][b][font=宋体][size=12pt]离子交换色谱法[/size][/font][/b][font=宋体][size=12pt][/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]通过载体表面带电基团与样品离子和淋洗离子进行可逆交换、离子偶极作用和离子吸附实现色谱分离。不同多糖尤其是多糖与蛋白质结合在一起的复合多糖，在一定pH条件下，所带电荷不同，则可根据各多糖上电荷的差异而达分离目的。[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]优点[/size][/font][font=Arial][size=12pt]:[/size][/font][font=宋体][size=12pt]⑴[/size][/font][font=宋体][size=12pt]具有开放性支持骨架，大分子可以自由进入和迅速扩散，故吸附容量大。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]⑵[/size][/font][font=宋体][size=12pt]具有亲水性，对大分子的吸附不大牢固，用温和条件使可以洗脱，不致引起蛋白质变性或酶的失活。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]⑶[/size][/font][font=宋体][size=12pt]多孔性，表面积大、交换容量大，回收率高，可用于分离和制备[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][size=12pt][font=Times New Roman]2
[/font][/size][b][font=宋体][size=12pt]毛细管电泳分析[/size][/font][/b][font=宋体][size=12pt]：[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]在糖类分析应用的难处在于：糖类物质一般为电中性，且亲水性较强，无发光基团，检测上存在困难。但是[/size][/font][size=12pt][font=Times New Roman] CE[/font][/size][font=宋体][size=12pt]具有高分离能力、高灵敏度、快速简便等特点，在糖的分析中已显示出它的优越性。[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][size=12pt][font=Times New Roman]2.1 Z5m}v N!VG
[/font][/size][b][font=宋体][size=12pt]单糖电泳[/size][/font][/b][font=宋体][size=12pt]：为中性糖，需要将其转化成带电荷的形式进行电泳分离。选用强碱性的缓冲液，使糖基上的羟基失去质子而带负电；也可选用硼酸盐缓冲液，与糖基形成带负电的络合物可直接进行分离，用紫外进行检测。单糖检测主要依赖于衍生，采用紫外或荧光衍生试剂。[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][size=12pt][font=Times New Roman]2.2
[/font][/size][b][font=宋体][size=12pt]寡糖和多糖电泳[/size][/font][/b][font=宋体][size=12pt]：分离组成相同而连接点不同寡糖同分异构体，常采用硼酸缓冲液。寡糖也需要衍生才能检测。多糖一般先用酸解或酶解的方法将其转化为寡糖后再进行分析。[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align][align=left][align=left][b][font=宋体][size=12pt]3 [/size][/font][/b][b][font=宋体][size=12pt]膜分离[/size][/font][/b][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]膜分离技术(membrane separation technology，MST)是一项新兴的高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力(如压力差、化学位差、电位差等)，使原料液中组分选择性通过膜。以压力差为推动力的膜分离过程包括微滤、超滤、纳滤、反渗透，根据筛分原理使某些组分选择性透过，实现提纯和浓缩。目前应用较多的是超滤和微滤技术。[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]3[/size][/font][font=宋体][size=12pt]．1 超滤[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]超滤 (ultra filtration，UF)的孔径范围为1 nm～100 nm，截留相对分子质量为10，～10 。溶解的盐和水会通过超滤膜，分子量在1 000以上的物质则被截留，故可从水和其它液体中分离出很小的胶体和大分子。超滤膜的另一特点是由于受渗透压的阻碍作用小，所以在相当低的压力差(0．04 MPa～0．70 MPa)下，仍具有高流通率。一种用于分子分离的膜分离方法，利用不同孔径的超滤膜排阻不同分子量的多糖，达到分离 。常用的有醋酸纤维素膜，聚砜酰胺膜等。该方法操作条件温和，不需添加化学试剂，适用于热敏药物。[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]3[/size][/font][font=宋体][size=12pt]．2 微滤[/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][font=宋体][size=12pt]微滤(micro filtration，MF)膜通常截留粒径大于0．05 m的微粒，多采用对称微孔膜，膜的孔径范围为0．1 m～5 m，操作压差范围为0．05 MPa～0．2 MPa。微滤 能有效去除比膜孔大的微粒和微生物，具有能耗低、无二次污染、分离效率高等特点，在多糖提取中可用于多糖液体的澄清和多糖精制。[/size][/font][size=12pt][/size][/align][/align] 谢谢提供宝贵资料
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