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深水 发表于 2006-10-19 23:17

色谱柱的安装

色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命.正确的安装请参考以下步骤. I8v5Xh W
步骤1. 检查气体过滤器,载气,进样垫和衬管等
G1Q/{x!Q p O3a 检查气体过滤器和进样垫,保证辅助气和检测器的用气畅通有效.如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物,需要将进样口的衬管清洗或更换.
Q|b s[g1f?W 步骤2. 将螺母和密封垫装在色谱柱上,并将色谱柱两端要小心切平 r*wc,c3N#v)`t
步骤3. 将色谱柱连接于进样口上 S7Z6?7u4Z
色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定.正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性.通常来说,色谱柱的入口应保持在进样口的中下部,当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差1-2cm,这就是较为理想的状态.(具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册)
I|7D/g3~k:e;lu 避免用力弯曲挤压毛细管柱,并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦,以防柱身断裂受损.
(P5p`$rZ\ 将色谱柱正确插入进样口后,用手把连接螺母拧上,拧紧后(用手拧不动了)用扳手再多拧1/4-1/2圈,保证安装的密封程度.因为不紧密的安装,不仅会引起装置的泄漏,而且有可能对色谱柱造成永久损坏. r$azZ0E7z%?1tg
步骤4. 接通载气9X.G%} dHQz
当色谱柱与进样口接好后,通载气, 调节柱前压以得到合适的载气流速(见下表).8X:o7nMr
柱前压设置为Psi
h k#?r @8X+}%P4w
L9c P]AXuG M`4J
15m
\4bMQ"b uc[0U 25m ^.B%F1Dk]/n7gfev!k7j
30m
2}p.xC3F0]
hm 50m
;H;v1U\9tc 100m 9YY*fcn:a2x4h)R
0.20mm ;`APh$K ZT3Ae!H
10-15 )]S;BC|]$a
20-30 +o5c0U-l
`5H
18-30 \5C mSX2mZ^$s
40-60 3T6W ? |Cy/C#y;rx1WXa
80-120 *] x4WO{s%T
W
0.25mm
&I@S5_0Is 8-12 AR(j#h|h!~#O
13-22
\2L"`o"ai 15-25 4Y$q@1jD'A ?
28-45 3F,?8^_D3W._"oW(i
55-90
/i$^M!G8H(p I6~ 0.32mm Nte-o xi%z;gA6k
5-10
-u&l[}rx~2b 8-15 ._/U!bl;k(fAjX$\X.`
10-20 #p Xq(T ?A/t0VL
16-30 )q]f#ckpsWE sc
32-60
O,KN']
ph&WR!w 0.53mm -j9TBidR$?.A1v
1-2
*lV7On`t)B)cJl 2-3
@"f5Q;dB!u2z$| 2-4 ];A*gSJ5Zc9S
4-8
[3I+ga[ K{jL 6-14 T6n^DB.s {Xc2[
(以上仅为建议的起始设置,具体数值要依据实际的载气流速.)
]@"s@
~O!ix 将色谱柱的出口端插入装有己烷的样品瓶中,正常情况下,我们可以看见瓶中稳定持续的气泡.如果没有气泡,就要重新检查一下载气装置和流量控制器等是否正确设置,并检查一下整个气路有无泄漏.等所有问题解决后,将色谱柱出口从瓶中取出,保证柱端口无溶剂残留,再进行下一步的安装.2i:U0r,Y?^s Wfm
步骤5. 将色谱柱连接于检测器上0G _,|*{z
其安装和所需注意的事项与色谱柱与进样口连接大致相同.如果在应用中系统所使用的是ECD或NPD等,那么在老化色谱柱时,应该将柱子与检测器断开,这样检测器可能会更快达到稳定.
VJ'l4a(O~4uDn]`!p 步骤6. 确定载气流量,再对色谱柱的安装进行检查
4}2G8GSU l6r] m0Q 注意:如果不通入载气就对色谱柱进行加热,会快速且永久性的损坏色谱柱.
6J!X*n|aZ 步骤7. 色谱柱的老化
f-l!b+l
K1mbP
色谱柱安装和系统检漏工作完成后,就可以对色谱柱进行老化了.对色谱柱升至一恒定温度,通常为其温度上限.特殊情况下,可加热至高于最高使用温度10-20℃左右,但是一定不能超过色谱柱的温度上限,那样极易损坏色谱柱.当到达老化温度后,记录并观察基线.初始阶段基线应持续上升,在到达老化温度后5-10分钟开始下降,并且会持续30-90分钟.当到达一个固定的值后就会稳定下来.如果在2-3小时后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势,那么有可能系统装置有泄漏或者污染.遇到这样的情况,应立即将柱温降到40℃以下,尽快的检查系统并解决相关的问题.如果还是继续的老化,不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线.
l0@g_g|eq 一般来说,涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长,而弱极性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短.而PLOT色谱柱的老化方法有各不相同.
fG``!w"I*? PLOT柱的老化步骤:
Q Y/e\Nt HLZ Pora 系列 250℃, 8小时以上
&m2p8\;g v9bR t F Molesieve(分子筛) 300℃ 12小时
i:Qz7ku bq*dQ Alumina(氧化铝) 200℃ 8小时以上
B\0\pT^ 由于水在氧化铝和分子筛PLOT柱中的不可逆吸附,使得这两种色谱柱容易发生保留行为漂移.当柱子分离过含有高水分样品后,需要将色谱柱重新老化,以除去固定相中吸附的水分.
4T"yQ.L9JBH!V9O 步骤8. 设置确认载气流速Z q7l`$o0P
pq/Mh
对于毛细管色谱柱,载气的种类首选高纯度氮气或氢气.载气的纯度最好大于99.995%,而其中的含氧量越少越好.
n(DA(p/X 如果您使用的是毛细管色谱柱,那么依照载气的平均线速度(cm/sec),而不是利用载气流量(ml/min)来对载气做出评价.因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度.,x@0OS s ]
推荐平均线速度值:_ },\A|(s,f2}
氮气:10-12cm/sec 氢气:20-25cm/sec
v:B_;`q4~%v 载气杂质过滤器
f;^wm'f f;^Se 在载气的管线中加入气体过滤装置不仅可以延长色谱柱寿命,而且很大程度的降低了背景噪音.建议最好安装一个高容量脱氧管和一个载气净化器.使用ECD系统时,最好能在其辅助气路中也安装一个脱氧管.~m/P%qJW
步骤9. 柱流失检测
&L)pInx2s
@P 在色谱柱老化过程结束后,利用程序升温作一次空白试验(不进样).一般是以10℃/min从50℃升至最高使用温度,达到最高使用温度后保持10min.这样我们就会的到一张流失图.这些数值可能对今后作对比试验和实验问题的解决有帮助.0H{ OAW{t F|f;B
在空白试验的色谱图中,不应该有色谱峰出现.如果出现了色谱峰,通常可能是从进样口带来的污染物.如果在正常的使用状态下,色谱柱的性能开始下降,基线的信号值会增高.另外,如果在很低的温度下,基线信号值明显的大于初始值,那么有可能是色谱柱和 GC系统有污染.f;P%C-K$r+O
其他:色谱柱的保存-]%?G9F%^
用进样垫将色谱柱的两端封住,并放回原包装.在安装时要将色谱柱的两端截去一部分,保证没有进样垫的碎屑残留于柱中.

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