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深水 发表于 2007-3-11 18:56

日立F-4500荧光分光光度计简易操作方法

[b][font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]〈一〉[size=3]  [/size][/color][/font][/font][/b][b][u][color=#000000][font=宋体]开机顺序：[/font][/color][/u][/b]
4M] b2{2j [font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（1）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][color=#000000][font=宋体]开机前首先确认主机两个开关：[/font][font=Times New Roman]POWER/MAIN[/font][font=宋体]均处于关闭状态（搬向[/font][font=Times New Roman]O[/font][font=宋体]处）。[/font][/color]Z?!L ["yd
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（2）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][color=#000000][font=宋体]先接通电源开关（[/font][font=Times New Roman]POWER[/font][font=宋体]），[/font][font=Times New Roman] 5[/font][font=宋体]秒钟后再按下氙灯点灯按钮，当氙灯点燃后，再接通主开关（[/font][font=Times New Roman]MAIN[/font][font=宋体]）。此时主开关上方绿色指示灯连续闪动三下。[/font][/color]2yTWo4Z1Z/A
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（3）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][color=#000000][font=宋体]接通电脑及打印机电源，[/font][font=Times New Roman]Win98[/font][font=宋体]开始建立，随后[/font][font=Times New Roman]F-4500[/font][font=宋体]操作界面自动进入。[/font][/color] uPK Qu.o*b9vTQ2`;R
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（4）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][font=宋体][color=#000000]按界面提示选择操作方式。[/color][/font]
w1Fu-b:Q+B*I*E pT [b][font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]〈二〉[size=3]  [/size][/color][/font][/font][/b][b][u][color=#000000][font=宋体]关机顺序：[/font][/color][/u][/b]E7M#Q)?O#^
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（1）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][font=宋体][color=#000000]逆开机顺序实施操作。[/color][/font]
NdRa}sE [font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（2）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][color=#000000][font=宋体]当电源开关关闭后[/font][font=Times New Roman]5[/font][font=宋体]秒钟，再次接通[/font][font=Times New Roman]10[/font][font=宋体]分钟。（目的是仅让风扇工作，使灯室散热）最后关闭电源开关。[/font][/color]
G,mP:U+vfA8ZS [b][font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]〈三〉[size=3]  [/size][/color][/font][/font][/b][color=#000000][b][u][font=宋体]操作界面介绍[/font][/u][/b][b][font=宋体]：[/font][/b][/color]\'\ IH,xS8?
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（1）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][font=宋体][color=#000000]当前显示的画面为模拟画面，即观测样品峰用。[/color][/font] P7w.yv*m*I[(p5g _
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（2）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][color=#000000][font=宋体]在模拟画面右侧，是仪器当前状态显示。它给出了当前的信号能量值，激发和发射波长及狭缝值，光闸（[/font][font=Times New Roman]Shutter[/font][font=宋体]）开[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]关状态等。[/font][/color]i0Y0J3oy"G2P
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（3）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][color=#000000][font=宋体]显示屏最上一行为八个菜单杆，分别为[/font][font=Times New Roman] File /Edit /View /Spectrophotometer /Tools /Utility /Window /Help[/font][font=宋体]。每个菜单杆下均有子目录，供用户选用。[/font][/color]+W*X Gi1~*ev
[font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]（4）[size=3]       [/size][/color][/font][/font][color=#000000][font=宋体]为了方便用户操作，将常用的子目录演变为[/font][font=Times New Roman] 23 [/font][font=宋体]个带彩图的快捷工具栏，用户随意点击后，操作界面立即更换，非常便利。该[/font][font=Times New Roman] 23 [/font][font=宋体]个快捷栏分布在显示屏的上方及右方，非常醒目。[/font][/color]
,q0d5]6^ ~ [b][font=宋体][font=Times New Roman][color=#000000]〈四〉[size=3]  [/size][/color][/font][/font][/b][color=#000000][b][u][font=宋体]波长扫描的简易操作[/font][/u][/b][b][font=宋体]：（[/font][font=Times New Roman]Wavelength Scan[/font][/b][b][font=宋体]）[/font][/b][/color]o`lT)B%Rd!c~
[color=#000000][font=宋体]点击快捷栏“[/font][font=Times New Roman]Method” [/font][font=宋体]后，立即显示了分析方法（[/font][font=Times New Roman]Analysis Method[/font][font=宋体]）的五个重叠界面，分别为“常规”（[/font][font=Times New Roman]General[/font][font=宋体]），“仪器条件”（[/font][font=Times New Roman]Instrument[/font][font=宋体]），“模拟画面”[/font][font=Times New Roman](Monitor)[/font][font=宋体]，“处理”[/font][font=Times New Roman](Processing)[/font][font=宋体]，“报告”[/font][font=Times New Roman](Report)[/font][font=宋体]。下面详细介绍每个界面：[/font][/color]y-kwh?a'{,V,v)?
[font=Times New Roman][b][font=宋体][color=#000000]（1）[size=3]      [/size][/color][/font][/b][b][color=#000000]General   [/color][/b][/font][b][color=#000000][font=宋体]（常规）[/font][/color][/b]r6~"qMZT
[color=#000000][font=Times New Roman]*Measurement [/font][font=宋体]（测量方式）[/font][font=Times New Roman]-------- [/font][font=宋体]选择[/font][font=Times New Roman]Wavelength [/font][font=宋体]（波长扫描）[/font][/color]
+XY@F]5a"`i^ [color=#000000][font=Times New Roman]*Operator     [/font][font=宋体]（操作者名）[/font][font=Times New Roman]---------[/font][font=宋体]键入人名[/font][/color]
"\Y1|$c,cB8]t [color=#000000][font=Times New Roman]*Instrument     ([/font][font=宋体]仪器型号[/font][font=Times New Roman]) ----------[/font][font=宋体]自动给出[/font][/color]
)xX!GOl1JU:i [color=#000000][font=Times New Roman]*Sampling      ([/font][font=宋体]样品名称[/font][font=Times New Roman]) ----------[/font][/color]
M-bDZwG!E9Kd [color=#000000][font=Times New Roman]*Comments     ([/font][font=宋体]注释表[/font][font=Times New Roman])--------------[/font][font=宋体]可输入简单说明[/font][/color]q6["rr M"\
[color=#000000][font=Times New Roman]*Load          ([/font][font=宋体]装载[/font][font=Times New Roman]) ----------------[/font][font=宋体]调用已存入的条件[/font][/color]
GZl-dB"b [color=#000000][font=Times New Roman]*Save          ([/font][font=宋体]存入[/font][font=Times New Roman])-----------------[/font][font=宋体]存储现有的条件[/font][/color]6Po&i
MF$B
[color=#000000][font=Times New Roman]*Save As      [/font][font=宋体]（另存）[/font][font=Times New Roman]-------------- [/font][font=宋体]另存现有的条件[/font][font=宋体][/font][/color]@0ru-J(GaY%I
[font=Times New Roman][b][font=宋体][color=#000000]（2）[size=3]      [/size][/color][/font][/b][b][color=#000000]Instrument   [/color][/b][/font][b][color=#000000][font=宋体]（仪器条件）[/font][/color][/b]
/}P$t{r k.Q"F,k [color=#000000][font=Times New Roman]*Scan  mode   ([/font][font=宋体]扫描方式[/font][font=Times New Roman]) ---------- Excitation      ([/font][font=宋体]激发波长扫描[/font][font=Times New Roman])[/font][/color]Hb[KP8R
[color=#000000][font=Times New Roman]Emission      [/font][font=宋体]（发射波长扫描）[/font][/color]
@8z
[!L-^%^9R [color=#000000][font=Times New Roman]Synchronous   [/font][font=宋体]（同步扫描）[/font][/color]K!W0n vCU&{!Qs
[color=#000000][font=Times New Roman]           *Data  mode  [/font][font=宋体]（数据方式）[/font][font=Times New Roman]---------Fluorescence   [/font][font=宋体]（荧光采集）[/font][/color]/C!z\2B!e#e
[align=left][align=left][color=#000000][font=Times New Roman]                                          Luminescence  [/font][font=宋体]（发光采集）[/font][/color][/align][/align][align=left][align=left][color=#000000][font=Times New Roman]                                          Phosphorescence[/font][font=宋体]（磷光采集）[/font][/color][/align][/align][align=left][align=left][color=#000000][font=Times New Roman]           *EM   WL   [/font][font=宋体]（发射波长）[/font][font=Times New Roman]---------[/font][font=宋体]输入范围[/font][font=Times New Roman] 200nm[/font][font=宋体]―[/font][font=Times New Roman]900nm[/font][/color][/align][/align]

深水 发表于 2007-3-11 18:57

*EX Start WL  （激发起始波长）---- 输入范围  200nm—890nm
?R,z\sF          *EX End WL   （激发终止波长）-----输入范围  210nm—900nm{V(o)c1b
         * EX    WL    (激发波长)-------------输入范围  200nm—900nm8^ u){6JJ|j4Em)U
         *EM Start WL  （发射起始波长）-----输入范围  200nm—890nm
ER4RT8M3Jj rH          *EM End WL   （发射终止波长）-----输入范围  210nm―900nm
&Gu]pe&oJ          *Scan speed    （扫描速度）-----------15,60,300,1200,2400,12000,30000nm/min{'}L}
A-}:\$P/z|
                                          六挡可选（磷光扫描：15,60,240nm/min） qF'HQMb ml(P
         *Delay        （延迟时间）------------输入范围  0¬―99秒（启动后延迟测量）
P:dLK@ sg          *EX  Slit     （激发单元狭缝）-------1.0, 2.5 ,5.0, 10.0, 20.0五挡可选。
Q[5Cu'x7Fj          *EM  Slit     （发射单元狭缝）-------1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 20.0五挡可选。
'h3@nw(A ax b;\          *PMT Voltage  （光电管负高压）-------400V, 700V, 950V三挡可选。
#Geph-A （一般选择700V）
$U;frM4o A          *Response     （响应速度）------------0.0004,0.01,0.05,0.1,0.5,2.0,8.0秒Auto八挡可选。速度快峰形分辨率高，但噪音大。速度慢反之。^Vh2X3{s
         *Corrected spectra （光谱校正）--------- 选定后则可使用已校正的光谱函数。M3t+Du+NG*N~
         *Shutter control   （光闸控制）--------选择控制状态，样品待测或重复扫描时激发光不能照射到样品上,避免产生化学变化。`T
h+E{y5j
         *Replicates    （重复次数）-----------可在1―99之间选择。（重复扫描用）*r
s"F cP4aqCwk
         *Cycle  time  （循环周期）-----------可在0―180分间选择。（重复扫描用）*Fi_{$w4k)R3p
lA
（3）        Monitor  （模拟监视）
x,a)Z%Nm1n
k%bG *Y-Axis Max  （纵轴标尺上限值）---- 一般样品预扫描后仪器自动赋值。1Y[;e%e+AB
*Y-Axis Min  （纵轴标尺下限值）----- 根据需要赋值。B.a!@K Fl K+E@~c
*Open data processing window after data acquisition（测量后打开数据处理窗口）
}Y.CR6yO
ke0O2} 一般选定。测定结果可自动存儲，便于后期处理。
*H%?9_T4Mt3Pk6jb           *Print report after data acquisition （数据采集后自动打印）--- 一般不选定。
/Sz5Rd/l5_N-]6M           *Overlay（重叠光谱图）-----可将光谱图重叠在监视画面上但重复扫描不可设定。
1M;{QA|x2O （4）        Processing  （处理方法）ZU pXnj?6m
简介：此界面主要是对已测定的图谱根据用户的要求进行选择处理。b/r9dz6Lr%V7\]
* CAT   （平均化）-------- 如选定则对重复测定的图谱进行平均处理。
"Y
{{3NJR}'e *Processing choices （处理方法的选择）----- 有如下四种处理方法：*e+F/u2k;H({/d
1)  Savitsky-Golay Smooth （        ）
3Vzc"@ PnF"r| 2） Mean Smooth   (平均平滑)tE j3ke
3)  Median Smooth（中间平滑）*`P{?7FA"zd
4）        Derivative    （微分求导） t+]pPcX)D`&W
*Processing steps （处理顺）---------- UJd8O'V6F9l0f$u
W(`
*Peak Finding     (峰检出) ----------- 有如下三项内容：
5NpC"Vgf 1）Integration method （检出方法）----- a) Rectangnlar (矩形)9\Sg$H?1N
                                  b) Trapezoid （斜方形）(s9GMW*]G
                                  c) Romberg  （罗伯格形）
'Y}m1Oj2Q^^fM    2）Threshold （阈值）----------决定信号峰的舍取。赋值范围0.001-1000。e)I3W$Xs l3sT&F*H
小于赋值的峰不打印结果。t Du(F9X,b7B
3）Sensitivity （灵敏度）------ 可改变放大器的放大倍数。一般设置为“1”。

深水 发表于 2007-3-11 18:57

（5）        Report  (报告格式)N*k j!o,P;t$}"u?
*Output （输出）----------------------有如下三种格式可选：
L|"I+b-qR$y 1）        Print Report --------------------- 打印报告（常用格式）,xmUb5H8W
2）        Use Microsoft Excel ------------将数据变换为微软Excel 格式。
+PG;q~%j#}+G 3）        Use print generator sheet------ 利用变换器（附选件）打印图表。&][Wg,g/?*d
           *Pientation （方位）---------------- 1m8}f7P5Z}
           *Pintable items （打印选项）------ 有五种项目可选：
+_Y+T&[@F5le 1）        Include data      （打印数据）
[Uy1M"z[ 2）        Include method   （打印方法）
3L6~-s#t[ 3）        Include graph     （打印图谱）
E/x NN[r,fQ 4）        Include data listing （打印数据表）]'a+b]|7s2TM
5）        Include peak table   (打印峰值表)
/C6x"to3awZ3S2b,S            *Printer Font  (打印机字形)--------- 可改变报告的打印字形。-I})di3QgS
〈五〉        时间扫描的简单操作： （Time Scan）  O(L4L-@0Wa|
简介：此扫描方式是EX,EM的波长均固定，仅观察样品随时间的变化。模拟画面的横坐标轴为时间单位。进入方法与波长扫描相同。(qEcR)K*v
（1）        General  (常规)
.Q`2nkS(X *Measurement   (测量方式)--------选择 Time Scan (时间扫描)
#F E1zNk{"[ （其它内容与波长扫描相同，故从略。)
/t-h%m^:h1be@r （2）        Instrument  （仪器条件）3k"Yu%rxR\
*Data  mode   (数据方式)-----Fluorescence  （荧光采集）
9Y$D0d`8sU Luminescence  （发光采集）
$l4JP7gKj Phosphorescence(磷光采集) ,Fr`,]
L S
           *EX  WL    （激发波长）------ 0nm,200nm—900nm 设定~LiTq
t
           *EM  WL    （发射波长）------ 0nm,200nm—900nm 设定
fYt`B%r|`qD:T
           *Time unit （时间单位）------ s,ms 两种单位可设定
hdK^ VG&K`            *Scan time （扫描周期）------ 10–3600s,1000–9999ms范围设定:V6g{f#P}T)C
（其它内容与波长扫描相同，故从略。）
y,w4`"~1cl （3）        Monitor  (模拟监视)
h!R ekp2\] *Y-Axis  （纵轴上下限值）----- 一般样品预扫描后仪器自动赋值。x#w x*A+cJ:Xq$w
          *X-Axis  （横轴上下限值）------时间轴， 根据需要设定+un3{8u2a0@I
（其它内容与波长扫描相同，故从略。）
~"Nhz Rn m+K$M1WB.dQ （4）        Processing  （处理方法）----- 内容与波长扫描相同，从略s%[-K"]1f
（5）        Report      （报告格式）----- 内容与波长扫描相同，从略
@#A Ny#u` D5J 〈六〉        光度计法的简单操作:  (PHOTOMETRY)2i sduW
f/PM
简介：光度计法亦称浓度直读法，也称工作曲线法。利用配制的具有梯度的标准样品，先做出一条标准曲线，然后再反测未知样品。
[mO&@`7G] （1）        General  (常规),lJ'Z]a[9Wrb
*Measurement  (测量方式)-------选择 Photometry（光度计）*}^dm9E j
（其它内容与波长扫描相同，故从略。）B'fH#q6B H~6H
（2）        Quantitation (定量条件)
nF#l&|!v4V *Quantitation type （测量类型）------ 1) Wavelength (指定波长)
k6{K M)d{6D 2) Peak area （峰 面 积）

深水 发表于 2007-3-11 18:58

3）Peak height (峰   高)$LV7^0p4p-lr
4）Derivative （导   数）8@t7KDHs`
5）Ratio      （比   率）g0a#lpT
*Calibration type (曲线校正类型)-------- 1）None      （没   有）
~ g:Xj-j7k                                      2) 1 st order（线性方程）!tX0c7E
~/r q
                                     3) 2 nd order（二次方程）
t*l/jgW"K#X:\ I}                                      4）3 rd order（三次方程） w6[2MQGt%P;s
                                     5）Segmented （折    线）2F'U2J"hL0YJx3p
*Num ber of wavelengths (波长数)------　当曲线校正选择“None” 时波长数可以在１－６间选择。其他校正类型只能在１－３间选择，但此时的波长数并不表示在若干波长值下可以同时测定样品的浓度，仅仅是对信号峰的一种处理方法。7@df,TBU1_UL
　　*Concentration unit (浓度单位)---------- 根据需要格式设定
bc
{Ej     *Manual calibration（手动校正）------ 根据公式校正ZG$oC1Y+{(N&}
　　*Force curve through zero (强制曲线归零)
xv7D2Np&q$T)r F 　　*Digit after decimal point （小数有效位）---可以在１－３间赋值
7uvc+S^%g$Xe （3）　Instrument   (仪器条件)
2D9E?7X.P      *Data mode   (数据方式)-----------  Fluorescence   （荧光采集）
Isnt2@/A5[ EM                                     Luminescence   （发光采集）i:G O%sX&X!Wb2Z
                                    Phosphorescence（磷光采集）
`Mm4`X'n7q-`g0^4i;Z     *Wavelength mode （波长方式）----- EX WL Fixed（激发波长固定）
;dCE%CQW-TO0u#T4B                                     EM WL Fixed（发射波长固定）
;ibO A A4C@Ke                                     Both WL Fixed（两側均固定）%_zf,]shM
    *Fixed WL （波长选定）--------- 可以选定1–6个波长值，波长值赋值范围
(HkLE(ta Ufi k A                                     0nm,200—900nm。
U/D{/jw?J2sQ     *EX Slit  （激发单元狭缝）----- 设定范围2.5,5.0,10.0,20.0nm
'Rt^P#U;Ge^     *EM Slit  （发射单元狭缝）----- 设定范围2.5,5.0,10.0,20.0nm _7SXSO~j
    *PMT Voltage (光电管高压)------- 设定范围 400V,700V,950V
h&ai;_YA'm&?     *Auto statistic cal.number （自动统计计算）----可以进行平均值，标准偏差， V8Vp-C p \
      变异系数的计算。为此目的则要设置样品重复个数，此数在2-4000间选择。oL&]R7u{x
    *Replicates  （重复次数）------ 重复测量次数，输入范围1-20。
'o:AM(e]2j"R     *Integration Time （积分时间）----- 0.1–10.0秒间设定。!A/qQjO(W(g
    *Delay  （延迟时间）-------启动后经过所设定的时间自动开始测量。AU&D2ly+T;UhWB
（4）  Standards   (标准样品表)
+\~;JI[Zg e,Z     *Number of  Samples （标准样品数目的设定）------ 1—20间设定。
&})SsB7|n.M2Z     *Update  (修定确认)---------- 当标样数确定后，点击此框后显示标样表以供赋值。
$WXx,w5xm S/jT
AP     *Insert   (插 入)---------- 点击此框可临时插入一个标样条目。F my?7d
    *Delete   (删 除)--------- 点击此框可临时删除一个标样条目。csb4];[[l
];`
（5）  Monitor   (模拟监视):r-aG Z1g!`^
       同前述相同，故从略。BN5qV@,P)p&v&L
（6）  Report    (报告形式)
*TSM0AQa        同前述相同，故从略。Y)Nhv9iHWu)xM
注：标样测量点击Measure框，未知样品测量点击F4键，结束测量点击F9键。

深水 发表于 2007-3-11 18:58

〈七〉        三维扫描的简易操作  ( 3-D SCAN ) G2ji&J7E&Q~"F v+r
  ^ R!u,m7z
说明：该功能的作用是，当某个样品不知最佳激发波长和最佳发射波长时，利用该功能0`;l+K8F)}`
     可自动快速地给出最佳条件。并可供其他特殊分析用。.g0y Y
HEY_XyN]

4sF!F6E H1b （１）        General  (常规)　　　
}ui8h8~H R
P *Measurement  (测量方式)-------------- 选择 3—D Scan 方式。;~
umG Z8Y4S
(２)  Instrument  (仪器条件)\(bFL D N
    *Data mode  (数据方式)----------可选择Fluorescence荧光或Phosphorescence磷光。
vi;R3gnST     *EX Start WL (激发起始波长)--------- 0nm,200nm—850nm间选择。
,boC-S"I[     *EX end WL (激发终止波长)-----------0nm,200nm—900nm间选择。
f,o#SVH#v^cvx     *EX Sampling interval (激发扫描间距)----- 1—50nm间选择。wC6DhJ"Z-Z
    *EM Start WL (发射起始波长)-------- 0nm,200nm—850nm间选择。co cSPC6b
    *EM end WL (发射终止波长)--------- 0nm,200nm—900nm间选择。'uQ0RF$D}re6O.Qn
    *EM Sampling interval (发射扫描间距)---- 1—10nm间选择。
CYOCs6g\S     *Scan speed  (扫描速度)-------- 任选。如为了快速，可选30000nm/分。
Ih7?V.Dh?,V/|   （３）　Monitor  (模拟监视)       从略。]JRxo'\B7gk
  （４）　Processing (数据处理)　　　从略。
p;aqJ4Bz 　（５）　Report   （报告）　　　　从略。

glasssnake 发表于 2007-3-30 22:05

谢谢楼主分享！

88dsz 发表于 2007-4-2 13:10

谢谢，顶

zxs1984 发表于 2007-4-24 19:55

看似很复杂的东西 呀。。。

mcm830103 发表于 2008-3-29 19:34

您好．我在实验中遇到一问题，同样的样品连续测量，或换比色皿方向测量，其荧光强度总是不一样，有时相差挺大，您遇到过这种问题吗？是怎样解决的？

zhangsj111111 发表于 2008-8-2 20:46

谢谢楼主了！真的不错！:victory:

李海洋 发表于 2008-9-25 17:58

谢谢

谢谢楼主的分享:)    今天刚做了那个实验:lol

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