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深水 发表于 2007-5-5 18:25

变性梯度凝胶电泳（DGGE）

[b]运用DGGE搜寻未知突变[/b],|0Oq&~,~!b.t
DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝胶内变性剂的浓度会熔解双链DNA 的不同区域。当温度达到最低熔解度区域的熔解温度(Tm) 时，DNA 部分熔解，在凝胶中形成迁移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的运行温度（50—65°C）和尿素与甲酰胺线性变性梯度条件下即形成了变性环境。梯度以垂直或平行于电泳方向形成。DGGE 是最灵敏的突变检测方法，其效率可达99%（Grompe 1993）。DCode 系统通过以下途径优化DGGE：
,Y4G_]Myn [list][*]温度控制模块提供45–70°C 内的一致运行温度[*]系统可运行2 块16 x 16 cm 凝胶或4 块7.5 x 10 cm 凝胶[*]可选择的MacMelt 或WinMelt 软件优化了GC 夹及引物的置放[/list][img]http://www.zlbj.com.cn/ComFolder/18show/3621/2006929185554914.jpg[/img] ` Yi"SI8P }G"{
[size=2][b]DGGE 的两种模式。[/b]A ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向垂直。从原生乳腺癌种扩增的p53 基因6 号外显子的野生型和突变型等位基因通过垂直DGGE（80V，56°C，2 小时）分离。感谢AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的数据。B ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向平行。p53 基因8 号外显子的野生型和突变型等位基因在8%丙烯酰胺：甲叉(37.5：1) 平行梯度（40–65% 变性剂）凝胶上，1 x TAE 缓冲液， 60°C，150 V，电泳2.5 个小时。左泳道，突变型等位基因；中，野生型等位基因；右，突变型与野生型等位基因。[/size]2wq:@MEB|
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+s0X`)X!M|Q B'R-gA [size=2][b]DGGE分离示意图。[/b]所示为一个变性梯度方向与电泳方向垂直的凝胶，以及一个有单个熔解区域的目标序列。野生型和突变型样品加入到制备孔内。在低变性剂浓度时，DNA 片段为双链，但当浓度增加时双链DNA 开始熔解，形成分枝分子。到浓度非常高时，DNA 片段可熔解形成2条单链。[/size]
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?+Ud7n4O5l$p DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝胶内变性剂的浓度会熔解双链DNA 的不同区域。当温度达到最低熔解度区域的熔解温度(Tm) 时，DNA 部分熔解，在凝胶中形成迁移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的运行温度（50—65°C）和尿素与甲酰胺线性变性梯度条件下即形成了变性环境。梯度以垂直或平行于电泳方向形成。DGGE 是最灵敏的突变检测方法，其效率可达99%（Grompe 1993）。DCode 系统通过以下途径优化DGGE：
-k%u})]5N)? [list][*]温度控制模块提供45–70°C 内的一致运行温度[*]系统可运行2 块16 x 16 cm 凝胶或4 块7.5 x 10 cm 凝胶[*]可选择的MacMelt 或WinMelt 软件优化了GC 夹及引物的置放[/list][img]http://www.zlbj.com.cn/ComFolder/18show/3621/2006929185554914.jpg[/img]
}#R*a'pu1~&f [size=2][b]DGGE 的两种模式。[/b]A ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向垂直。从原生乳腺癌种扩增的p53 基因6 号外显子的野生型和突变型等位基因通过垂直DGGE（80V，56°C，2 小时）分离。感谢AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的数据。B ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向平行。p53 基因8 号外显子的野生型和突变型等位基因在8%丙烯酰胺：甲叉(37.5：1) 平行梯度（40–65% 变性剂）凝胶上，1 x TAE 缓冲液， 60°C，150 V，电泳2.5 个小时。左泳道，突变型等位基因；中，野生型等位基因；右，突变型与野生型等位基因。[/size]
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H] P+r(g,FN [size=2][img]http://www.zlbj.com.cn/ComFolder/18show/3621/2006929185555961.jpg[/img][/size]
],Q#|q*ou-E [size=2][b]DGGE分离示意图。[/b]所示为一个变性梯度方向与电泳方向垂直的凝胶，以及一个有单个熔解区域的目标序列。野生型和突变型样品加入到制备孔内。在低变性剂浓度时，DNA 片段为双链，但当浓度增加时双链DNA 开始熔解，形成分枝分子。到浓度非常高时，DNA 片段可熔解形成2条单链。[/size]

深水 发表于 2007-5-5 18:26

变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradinent electrophoresis,DGG

DGGE法分析PCR产物，如果突变发生在最先解链的DNA区域，检出率可达100％，检测片段可达1kb，最适围为100bp-500bp。基本原理基于当双链DNA在变性梯度凝胶中进行到与DNA变性湿度一致的凝胶位置时，DNA发生部分解链，电泳适移率下降，当解链的DNA链中有一个碱基改变时，会在不同的时间发生解链，因影响电泳速度变化的程而被分离。由于本法是利用温度和梯度凝胶迁移率来检测，需要一套专用的电泳装置，合成的PCR引物最好在5`末端加一段40bp-50bp的GC夹，以利于检测发生于高熔点区的突变。在DGGE的基础上，又发展了用湿度梯度代替化学变性剂的TGGE法（温度梯度凝胶电泳temperature gradient gelelectrophoresis,TGGE）。DGGE和TGGE均有商品化的电泳装置，该法一经建立，操作也较简便，适合于大样本的检测筛选。

liuxiuming 发表于 2007-7-17 16:15

请教DNA序列分析电泳槽能代替DGGE做到微生物群落结构分析吗？

我是新手，一般进口的全套DGGE装置太贵了，而国产的又找不到。请教各位大侠DNA序列分析电泳槽能代替DGGE做到微生物群落结构分析吗？希冀不吝赐教。t8D#i+yu-p.\.E e2A)i
谢谢！
FOz'Q#P"F#B -~:v8@_ l_:b~,U
[email]liuxm@mails.gyig.ac.cn[/email]

phddms 发表于 2007-7-21 09:37

定一定，胜读十年书

wjf0355 发表于 2007-7-23 14:31

顶！

nanyuan 发表于 2008-6-21 23:45

请问那里DGGE/TGGE电泳做的比较成熟

请问那里DGGE/TGGE电泳做的比较成熟,我们没有仪器，请问那里有专业做这个的，我的邮箱[email]yutao5816@126.com[/email]

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