蛋白质检测芯片的制备
理想蛋白质检测芯片应该含有大量,高亲和性的,专一的蛋白质检测试剂,每种试剂检测一种特定的蛋白质.目前人们在蛋白质检测芯片中研究较多的是抗体芯片14 .Huang等15 在一个6 cm×8 cm的模板上用计算机印刷了504个点(18×28),用于指导膜上点样.他们用2μL的吸管人工点样,每个样点0125μL.首先将辣根过氧化酶点在膜上作为检测向导,再将蛋白质,抗体,抗原点在膜上,最后,将膜浸入感兴趣的蛋白质,抗体或抗原中,实现对蛋白质,抗体或抗原的高通量检测.他们还评价了不同膜制备蛋白质芯片的优缺点.该方法快速,简便,且成本较低.它存在的主要问题有1)大量抗体不易得到;
(2)用增强化学发光法(ECL)检测灵敏度很高,但误差较大;
(3)由于蛋白质相互作用的复杂性,用该法尚有一定的局限性.为了寻找高专属性的蛋白质检测试剂,许多人正在制备灵敏度更高,交叉反应更少,且具有新标记物的重组抗体和人工抗体16 .但是,抗体芯片一个固有的缺点在于它能够被分析样品中的蛋白酶所破坏14 .从长远来看,人们很可能会合成一些其它的试剂或采用其它的方法用于蛋白质的检测.如:将半导体纳米量子点用于高通量蛋白质的测定.由于半导体纳米量子点具有宽的激发光谱,窄的发射光谱及很高的量子产率,且荧光漂白速率慢,在高通量生物分析中得到了人们广泛的关注.Sun等17 首先将免疫球蛋白(IgG)固定在玻璃芯片上,然后与抗体结合,再把芯片浸入抗原溶液中,最后将浸入连有的抗体溶液,用激光共焦扫描荧光图象分析系统进行分析.该方法灵敏度很高,但是连接与抗体连接的半导体纳米量子点稳定性不好.本研究组和庞代文研究组采用一种简单的方法直接将抗体和抗原等物质修饰在CdSe/ ZnS核壳型半导体量子点上,方法简单,修饰后稳定性好.John18 制备了一种纳米电极阵列芯片,该电极的空8JFT p a5MJ
间分布,高度,宽度和电化学成分可以变化,使得蛋白质特性的电子接收器直接建立在具有该纳米电极的芯片上而不用任何特殊的试剂或微粒.由于它们的尺寸很小,大量不同的接受器可以作为阵列建立在一个芯片上.该芯片可以用来检测,表征和量化溶液中单个微粒如蛋白质及复杂的蛋白质混合物等.该阵列操作简单,但在特异性,高通量方面有待改进.
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