蛋白质芯片检测方法
[size=2]目前蛋白质芯片主要有两种检测方法,一种为标记检测,另一种为非标记检测.一些荧光试剂如Cy3,Cy5,量子点等经常作为探针标记蛋白质,标记后用荧光显微镜直接观测或成像.化学发光体系中辣根过氧化物酶,碱性磷酸酶及化学发光试剂异鲁米诺等也常用于蛋白质的标记.这些方法一般灵敏度较高,主要缺点是操作复杂,标记后大大改变了蛋白质的表面特征,尤其是在改变赖氨酸侧链正电荷时,可能在很大程度上导致蛋白质的变性.另一种标记方法是同位素标记法.为了克服质谱技术中无法区别两个样品中同一蛋白的缺陷, Kodadek 10 报道Aebersod等应用了同位素标记技术,这种标记技术类似于两种颜色的标记.同荧光标记技术一样,同位素标记技术也有很多缺陷而不能很好地用于蛋白质芯片检测.
在蛋白质芯片的检测研究中,一个主要的发展方向是设计一种不需要任何样品标记的检测方法.靳刚 19 将生物光学显微镜成像技术和集成化多元蛋白质[/size][size=2][b]芯片技术[/b]结合,设计了一种新型光学蛋白质芯片.利用光学显微镜可直接检测蛋白质的相互作用.该方法样品用量少,无需标记,快速简便.然而它542第2期梁建功等:蛋白质芯片及其分析应用新进展 用于蛋白质定性,定量分析时,难以消除一些蛋白的非特异性结合.Cahill等 20 设计了一种微量蛋白质pPXR DG SF
检测仪(MPIs),该仪器利用二维凝胶电泳碎片离子数据和基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI2TOF2MS)记录的检测结果进行比较分析,从而确定蛋白质芯片上的未知物.这项技术正在研究之中.表面等离子体共振(SPR) 21 , 22 也是一种很有发展前景的非标记蛋白质芯片检测技术.当一束平面单色偏振光在一定的角度范围内照射到镀在玻璃表面的金属银或金的薄膜上发生全反射时,如果入射光的波向量与金属膜内表面电子(称为等离子体)的振荡频率相匹配时,将引起电子共振,即表面等离子体共振.入射光的能量导致金属膜表面电子发生共振,电子吸收光子能量使被反射光的强度达到最小,这种最小化发生时的入射光角度称为SPR角.芯片上物质质量发生改变时,SPR角会发生变化,从而记录金属芯片表面化合物的质量改变.这是一种十分灵敏的技术.目前SPR应用于蛋白质芯片
上的困难是:不能在很短时间内测量成千上万的蛋白质斑点,而且,这一技术还需要建立蛋白质定量的尺度.当这些问题解决之后,SPR将是一项极有发展前途的蛋白质芯片检测技术.
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