体内药物分析应用高效毛细管电泳的在线样品制备技术
1． 前言高效[color=#990000][b]毛细管电泳[/b][/color]（CE）是一种快速，廉价，高分辨率的分析测试手段，在体内药物分析中的应用较为广泛。CE应用于体内药物分析的优越性比较明显：适应体内药物分析的痕量分析要求，分析速度快，试剂，样品的用量要求小等优点使CE具有广泛的应用前景。但是，体内药物分析自身的特点也制约了CE的广泛应用，其突出的矛盾在于体内药物分析的样品过于复杂，而CE分析测试的载样量过小，因此解决样品制备的快速，自动化问题[1,2]将会大大促进CE在体内药物分析中的应用。本文对近年来出现的几种应用于CE的直接进样方法进行简述。
2． 关于样品制备需要解决的问题K;b*g#Ru
制约CE广泛应用主要有以下几点原因[3]：B?)c n ^ ~W9y
（1） 生物样本（血清，血浆，尿样）通常含有较高浓度的无机组分。使得在CE中不能适用较高的载样量，否则会出现不可预计的样品堆积。
（2）一些生物样本（血清，血浆）中含有较高浓度的蛋白质。带电的蛋白质会在CE分析过程中影响样品的分离。u.z k4xn*|
（3）虽然CE具有很高的分离效能，但不能排除在分析复杂的多组分生物样本时会发生样品峰的重叠。
（4）除非使用较高灵敏度的检测手段，否则很难达到良好的最低检测限。解决以上问题的一种方法是使用高灵敏度，高选择性的检测器，取代CE传统使用的紫外、电导检测器：G.Hempel和G.Blaschke[4]应用激光诱导荧光检测器分析了人尿样中的Zolpidem及其主要代谢产物，取得良好的结果。但更为有效的方法是采用更为先进的样品制备技术。常用的样品制备技术有液液萃取、液固萃取，渗析，超滤等，下面将介绍几种新兴的制备技术。^)f9{(rf0xc i-j)r J
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3． 几种新制备技术的应用9\&qHJi `
3．1微透析E3s)lz^Y#S IH w']
微透析（Microdialysis）[5]技术兴起于二十世纪七十年代，其原理是利用膜透析，对生物样本液体进行流动性的微量连续采样，可以纯化样本，并具有取样量少，易于实现在线直接进样的分析的优点。在药理学、药代动力学和生物药剂学的研究中已经成为重要工具。(V&u:Cm6f5l
微透析的取样装置主要由注射泵、微透析探针、连接管和收集器组成。微 R P%b3m3} V3I`
量注射泵流速在0.5-5μl/min，探针常用长度在0.5-10mm，这就决定了微透析技术取样量少，样品和试剂回收率低，也在定量方面提出了更高的要求。CE具有快速，高效，微量进样和灵敏检测的优势可以成为微透析采样技术较为合适的联用检测手段，S. Tellez[6]等用微透析取样技术联用CE检测大鼠的脑组织和血液中的Phenobarbital的浓度，验证血脑屏障（BBB）的存在，微透析探针直接插入大鼠的脑组织及血管中，取得良好的试验结果。
3．2 电渗析
与微透析相似的一种采样技术，不同的是微透析取样仅仅是一种按浓度梯度逆向扩散而不具有选择性的动态过程，无外力作用，回收率较低，一般为20%-30%,所以不具备浓集样本的能力。电渗析（Eectrodialysis）[5]技术在透析膜两侧加载一个高电场，是待测组分不仅沿浓度梯度扩散，还选择性的电迁移通过透析膜，透析膜两侧的电导差异具有样品的浓集效应，也易于和CE联用。其装置由供给室（donor）和接收室（acceptor）组成，可按静态和动态两种方式操作。B. A. P. Buscher等[7]在电渗析联用检测了人血浆中的磷酸肌醇的血药浓度，并加强了电渗析的装置，取得良好的实验结果。
3．3 毛细管等速电泳
毛细管等速电泳（CITP）[3,5]的分离原理与其他的CE方法不同，它具有独特的电解质系统：前导电解质和尾随电解质，首先前导电解质充满整个毛细管柱，前导电解质具有较高的淌度，加载样品后，电泳槽中的电解质溶液是尾随电解质，具有比前导电解质较低的淌度，于是样品取代夹在前导电解质和尾随电解质中间电迁移，样品组分区带的浓度由前导电解质浓度决定，具有区带锐化和区带浓缩的作用，CITP是CE分析测试理想的在线微量浓集及进样技术。CITP-CE的联用有对接式耦合和套接式耦合两种，其浓缩效率很高。Foret[8]等在分析蛋白质过程中提出CE单柱短暂CITP浓集方法，通过大体积进样和CITP浓集大大降低了检测限，提高了分析灵敏度。M. Dankova等[3]用CITP联用CZE分离测定了人尿样中的Trytophan的对映体。*CVC$x9xh)`p Z
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4． 结论
通过以上介绍可以看出，顺利解决CE 的在线样品制备技术后，CE在生物大分子分离、手性对映体拆分、有机药物分析特别是生物样本中的药物分析方面将会显示出强大的技术优势和广泛的应用前景。 顶 好 :D
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